기존의 컬럼 크로마토 그래피
2. 사식학 열 (회전 유형)
3.Chromatographic 컬럼 (매뉴얼)
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설명
기술적인 매개 변수
기존의 컬럼 크로마토 그래피정지상과 이동 상 사이의 상이한 물질의 분포 비율 차이, 또는 상이한 물질에 대한 고정 상의 상이한 보유 용량을 사용하여 물질 분리를 달성한다. 혼합물이 이동상으로 크로마토 그래피 컬럼을 통해 흐르면 컬럼의 고정상과 상호 작용합니다 (예 : 용해, 흡착 등). 혼합물에서 각 성분의 물리적 및 화학적 특성 및 구조의 차이로 인해 고정 상과의 상호 작용의 크기와 강도도 다릅니다. 동일한 구동력 하에서, 정지상에서 각 성분의 보유 시간은 다르므로 혼합물의 성분이 특정 순서로 컬럼 밖으로 흐르도록 분리됩니다.
매개 변수
살충제 잔류 물 감지
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우리는 종종 그렇게 말합니다기존의 컬럼 크로마토 그래피실제로 컬럼 크로마토 그래피 분리는 컬럼 크로마토 그래피라고도합니다. 그것은 1903 년 러시아 과학자들에 의해 처음 발명되어 사용되었습니다. 그것은 식물 안료 용액을 탄산염 칼슘 분말로 분쇄하고 탄산 칼슘 분말에서 상단에서 아래로 다른 컬러 밴드를 발견했습니다. 상이한 컬러 밴드를 분리하고 추출함으로써, 비교적 순수한 엽록소, 루테인 등을 얻었다.
100 년의 발달 후,이 방법은 비교적 성숙 해졌으며, 고정상은 단일 탄산 칼슘에서 알루미나 (산성, 중성, 알칼리성, 실리카 겔, 활성탄 탄소 등으로 나눌 수있는 단일 탄산 칼슘에서 알루미나로 진화했다. 그 중에서도 실리카 겔 중에서 일반적으로 일반적인 상 실리카 겔 및 리피스 단계 겔로 나뉘어진다!
고정 상 (실리카 겔)은 일반적으로 정제되고 활성화되어야하며 입자 크기는 균일해야합니다. 이론적으로, 입자 크기가 작고 단위 질량 당 표면적이 클수록 흡착 용량이 높아지고 분리 효과가 더 좋습니다.
그러나 실질적으로 사용하면 고정 상 입자가 너무 작을 때 두 가지 상황이 종종 있습니다. 하나는 무게가 가볍고 공기 중에 쉽게 떠 다니는 것입니다 (실리카 겔은 인체에 의해 저하 될 수 없으며 더 미세할수록 독성이 더 큽니다). 둘째, 작은 입자는 또한 입자 사이의 작은 간격을 유발하여 느린 용매 유량과 시간 소비를 초래할 수 있습니다. 실리콘을 예를 들어, 실리콘을 가장 많이 사용하는 실리콘 크기는 현재 200-300 메쉬입니다.
컬럼 전달 방법 측면에서, 앞에서 언급 한 순환 순환 준비, 효율적인 액체 상 제조 및 컬럼 전달 기계와 같은 자동 분석 장비 외에도 수동 컬럼 전달은 주로 대기압 칼럼 통과, 감압 열 통과 및 가압 컬럼 통과의 세 가지 유형으로 나뉩니다.
그 중에서, 컬럼을 통한 억제는 용리액의 빠른 유속으로 인해 흡착 효율이 떨어지며, 이는 대부분의 트레이 수의 손실과 열악한 분리 효율로 이어진다. 상대적으로 개방 된 TLC 플레이트를 갖는 샘플을 분리하는 데 적합하며, 특히 생성물에 하나의 큰 극한 불순물 만있는 샘플에 대해; 대부분의 시간은 화합물의 전처리에 소비되어 조심스럽게 정제하기 전에 약간의 불순물을 제거합니다. 사용 중 부정 압력으로 인한 용매 증발은 컬럼의 외부 표면에 다수의 물방울을 응축시킬 수 있음에 주목해야한다. 물에 민감한 화합물을 쉽게 시도해서는 안됩니다.
대기압 컬럼 통과는 세 가지 중에서 가장 효과적인 분리 방법이지만, 용매가 너무 느리게 움직이기 때문에 최상의 분리 효과조차도 효율에 영향을 줄 수 있습니다. 따라서 압력이 일반적으로 적용되며, 이는 가압 된 열 통과라고합니다. 그러나 압력이 너무 높아서는 안됩니다. 일반적으로 이중 체인 볼은 수동 작동에 사용되며 어류 펌프는 자동 작동에 사용됩니다. 둘 다 그림과 같이 수정 될 수 있습니다.
기존 열 교차 과정 :
준비 작업이 잘 수행되어야합니다.
열을 선택할 때 샌딩 보드가 있는지 확인하십시오. 샌딩 보드가없는 기둥의 경우 바닥에면으로 바닥을 채우십시오. 실리콘이 나오지 않도록 막을 수있는 한면이 너무 두껍거나 얇아서는 안됩니다. (블로거는 옷걸이를 직접 해체하고 플러그의 콘센트에면을 삽입하는 데 사용했습니다).
최소 극성 용리액, UV 램프 (실험실 직원, 핸드 헬드, 언제든지 사진을 찍을 준비), 압력 장비 및 필요에 따라 테스트 튜브 랙을 준비하십시오!
적절한 컬럼을 선택하고 실리콘 젤을 넣고 실리콘 젤을 담그고 평평하게하십시오.
선택기존의 컬럼 크로마토 그래피매우 중요하며 크기는 제품의 양에 따라 계산되어야하며, 일반적으로 다음과 같이 나눌 수 있습니다.
몇 밀리그램의 컬럼 (총 합성을위한 최종 선택);
수십 밀리그램의 컬럼 (방법 론적 팽창 기판);
500 밀리그램 ~ 1 그램의 컬럼 (방법론을 원료로 사용);
약 5G 및 더 큰 규모.
실험실에서 열 지름과 높이의 가장 흔한 비율은 일반적으로 1 : 2.5와 1:15 사이입니다. 샘플 로딩 동안 정지상으로 사용되는 실리카 겔의 양은 샘플의 약 20 ~ 40 배이다. 열을 선택하는 표준은 샘플의 TLC 플레이트 등반 상황을 기반으로해야합니다. 근접성에 많은 불순물이있는 경우 가능한 한 더 큰 열을 선택하여 샘플을 작은 얇은 층으로 덮을 수 있도록하십시오 (5mm 미만의 권장 두께). 불순물이 멀리 떨어져 있다면,이 두께는 자연스럽게 증가 할 수 있지만, 제품을 단순히 세척하지 않는 한 샘플의 두께가 2cm를 초과하는 것이 좋습니다.
많은 사람들이 실리콘이 더 두껍더라도 더 많은 실리콘을 첨가하는 것이 잘 분리 될 수 있다고 생각하는 실수를합니다. 이 대답은 부정적입니다!
그 이유는이 사람들이 아래와 위와 위의 샘플이 같은 선에서 실행되지 않았다고 생각하지 않았기 때문에 순수한 것들만 얻을 수 있었기 때문에 대부분의 순수한 것만 얻을 수 있었으며, 대부분은 부정확 한 시간과 용매를 낭비하지 않고 교차했습니다!
이것이 바로 샘플이 얇아 져야하는 이유이기도합니다!
컬럼을 선택한 후, 공급 깔때기를 통해 실리콘을 추가 할 수 있습니다. 동시에, 마스크를 착용하고 Fume 후드에서 작동해야합니다. 그 이유는 블로거 (Silicosis)에 의해 정교화되지 않을 것입니다.
실리카 겔의 침윤에 대해서는 권장되는 과정이 다음과 같습니다. 먼저, 실리카 겔 컬럼을 수직으로 설치 한 실리카 겔 컬럼을 수직으로 설치하고, 손으로 실리카 겔 표면을 평평하게하고, 실리카 겔 컬럼의 바닥을 워터 펌프에 연결하고, 실리카 겔을 펌핑 한 다음, 위의 최소 극성 용리액에 붓습니다. 용리액이 새어 나갈 때는 셧다운 밸브를 닫으려면 용매가 워터 펌프에 펌핑되는 것을 방지하십시오.
그런 다음 압력 하에서, 실리콘 겔은 가장 적은 양의 개발 제로 7 개 또는 8 개의 열 볼륨을 플러시하여 균일하게 흡수 될 수있다.
위의 샘플
샘플링은 습식 샘플링 및 건식 샘플링으로 나뉩니다.
(1) 습식 샘플링.
권장되는 방법은 고무 팁이있는 피펫을 사용하여 샘플을 빨고 실리콘 젤의 상단 섹션에 가깝게 층을 덮을 때까지 샘플을 천천히 균일하고 균일하게 물린 다음 샘플을 추가하지 않고 실리콘 젤 층에 유성 물질을 침수시키기 위해 약간의 압력을 가하는 것입니다. 유성 물질을 실리콘 층에 담그고 모든 샘플이로드 될 때 까지이 과정을 여러 번 반복하십시오!
일부 신입생들은 왜이 작업이 습식 공정 오일을 한 번에 코팅하는 대신 수행되는지 궁금 할 수 있습니까?
실제로이 작업은 샘플 층의 유효 높이를 줄일 수 있습니다. 이 시점에서, 컬럼 크로마토 그래피는 이미 시작되었고, 후속 샘플은 이전 샘플을 실리카 겔에서 흡착하고 desorb로 밀어내는 용매와 같습니다.
(2) 건식 샘플링의 경우.
절대적으로 필요하지 않으면 권장되지 않습니다. 고체 샘플은 구타 또는 결정화하는 것이 좋습니다. "부도덕 한 방법, 에틸 아세테이트 대 물, 고층 오일의 초음파 진동 보조 결정화"및 "실험실 재결정 방법 공유"가 권장됩니다.
건식 샘플링은 일반적으로 두 가지 문제를 가져옵니다. 한편, 샘플 혼합 공정 동안, 샘플과 실리카 겔 사이의 반응 가능성은 로터리 증발의 온도를 높여야한다는 것; 한편, 건식 로딩은 흡착제가 샘플 층에 도입되어 샘플 층의 높이 또는 컬럼의 크기를 증가시켜 더 많은 시간과 더 많은 용매가 필요하다는 것을 의미합니다.
다른 선택이 없다면, 젖은 방법과 비슷한 요구 사항을 가진 흡착 된 파우더를 컬럼에 천천히 붓습니다.
무수 황산 나트륨 또는 석영 모래를 첨가하십시오
용리액을 첨가하는 동안 샘플 층에 영향을 미치지 않기 위해, 불균일, 변형 및 분리 효율에 영향을 미치기 위해, 무수 황산 나트륨 또는 석영 모래의 층이 일반적으로 샘플 층의 상단에 놓여있다.
우리의 엔지니어들은 개인적으로 무수한 황산나트륨을 선호하기 때문에 건조 기능이 있고 휘발, 열 흡수 및 응축이 발생하기 쉬운 디클로로 메탄과 같은 용매에 친숙하기 때문입니다!
그라디언트 용리, 샘플링 및 수집
로드 후 먼저 {2-3 열 볼륨 (하나의 열 볼륨은 모바일 위상의 부피로 정의 됨)에 대한 작은 극성 용매 (생성물이 통과 할 수없는 용매)로 컬럼을 균일하게 헹구고 용리에 대한 비율을 선택합니다.
칼럼을 통과하는 용리함을 선택하는 방법은 무엇입니까?
용리액의 비율은 제품의 RF 값에 도달 할 때의 비율입니다.
이것은 내가 많은 책을 읽고 공유 한 열 세척의 경험이며 실제 과정도 매우 유사합니다. 개인적으로, 나는 그라디언트를 두 번 줄이는 것을 선호합니다.
예를 들어, TLC 플레이트 등반에 대한 솔벤트가 PE/EA =2 : 1 인 경우 블로거는 PE/EA =4 : 1에서 구배 용출을 시작하고 PE/EA =2 : 1에서 종료 될 가능성이 높으며 일반적으로 더 나은 결과를 초래합니다.
용리액을 수집 할 때의 기술도 있습니다. 먼저 더 큰 테스트 튜브를 선택할 수 있으며 TLC가 대상 지점에 접근 할 때 더 작은 테스트 튜브로 전환하십시오. 이것은 더 많은 것을받을 가능성을 줄이고 불순물을 피할 수 있습니다.
불순물 지점과 제품 포인트가 서로 가까이있는 상황, 특히 형광이 약한 상황을 만나면 압력을 가하지 말아야합니다. 대신, 정상 압력 아래에서 열을 전달하고 절반 이하의 튜브가 연결될 때마다 튜브를 변경하여 정제 확률을 증가시킬 수 있습니다.
기둥을 적시에 다루지 말아야합니다!
많은 사람들이 나중에 TLC 이후에 하나 또는 두 개의 튜브에 제품이 없을 때 기둥이 통과되고 건조되었다고 가정하는 습관이 있습니다.
수율이 계산할 때 수율이 너무 낮았거나 스펙트럼을 만들었을 때 스펙트럼이 잘못되었고 잘못된 점을 놓친 것을 발견했습니다. 나는 그것을 깊이 후회했다.
따라서 원하는 지점을 완료 한 후 열을 처리하기 위해 서두르지 않는 것이 좋습니다. 대신, 처리 전에 수율과 일치하도록 핵 자기 공명을 수행하십시오.
바쁘거나 서두르면 다른 화합물을 정화하기 위해기존의 컬럼 크로마토 그래피, 높은 극성 양성 혼합 용매로 헹구고 식별 결과를 위해 용리액 의이 부분을 별도로 두는 것이 좋습니다.
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